9no. TEMA: IDENTIFICA BACILOS ACIDO-ALCOHOL RESISTENTE

ÁCIDO ALCOHOLRESISTENTE

   Es la propiedad física de algunas bacterias a la resistencia a la decoloración de la fucsina básica (rojo) la cual penetra en la célula por acción del fenol y el calor.

Las bacterias ácido-alcohol resistentes no pueden ser clasificados según la tinción de Gram, la cual es la técnica más común en la microbiología contemporánea, sin embargo puede ser teñido con algunas tinciones concentradas combinadas con calor. Una vez teñida tiene la capacidad de resistir la decoloración de una combinación de alcohol- ácido, el cual es el decolorante más común en los protocolos de tinción de bacterias, de donde viene el nombre Alcohol-ácido resistente.

La alta concentración de ácido micolico en la pared celular es la causante, como las bacterias del género Mycobacterium, de la baja absorción y alta retención de la tinción (fucsina). La forma más común para poder identificar este tipo de bacterias es a través de la técnica de tinción de Ziehl-Neelsen, donde la bacteria queda teñida en rojo y se agrega una tinción de contraste de nombre azul de metileno la cual permite apreciar de mejor forma la bacteria.

                                   

Variante clásica o "en caliente"[editar · editar fuente]

Ésta y la siguiente variantes son para preparaciones citológicas.

1. Hacer un frotis de la muestra.
   1. La fijación al calor asegurará de que el frotis quede adherido al portaobjetos. Un frotis muy delgado puede darle resultados falsamente negativos y un frotis muy grueso puede desprenderse del portaobjetos durante la tinción.
   2. Utilizando pinzas, coloque los portaobjetos en una gradilla de tinción con los extendidos hacia arriba. Nunca tiña más de 12 portaobjetos a la vez.
2. Dejar el frotis sobre el puente de tinción.
3. Aplicar fucsina-fenicada.
   1. Deje que el colorante permanezca sobre los portaobjetos durante 5 minutos. Mantenga el calor durante este período.
4. Calentar con un mechero hasta la emisión de vapores (3-5 minutos).
   1. Se requiere el tiempo adecuado para que la fucsina fenicada penetre y tiña la pared celular de la bacteria. No deje que hierva o se seque el colorante.
   2. Lave suavemente el colorante de cada portaobjetos con agua corriente fría hasta que toda la tinción libre quede lavada. Lave suavemente de manera que el extendido no se barra del portaobjetos. Retire el exceso de agua.
5. Decolorar con alcohol-ácido.
   1. Cubra cada portaobjetos con la solución decolorante, tal como alcohol ácido y manténgalo sobre el portaobjetos durante 7 minutos. Si no se decolora suficientemente, el contenido del esputo que no son bacilos TBC puede permanecer teñido. Enjuague con agua una vez más los portaobjetos y quite el exceso de agua. Si los portaobjetos aún están rosa, aplique una cantidad adicional de la solución decolorante de 1 a 3 minutos.
6. Aplicar azul de metileno (1 minuto).
   1. Aplique la solución de contraste, azul de metileno, durante 1 minuto.
7. Enjuagar con agua
   1. Vuelva a enjuagar con un leve chorro de agua e incline cada portaobjetos hasta drenar el exceso de agua. Finalmente, coloque cada portaobjetos en una gradilla a que sequen al aire.
8. Ahora coloquele una pequeñita gota de aceite de inmersión y haga la observación al microscopio con 100 x 100

2da. TEMA: APORTE DE CIENTIFICOS A LA BACTERIOLOGIA

APORTE DE CIENTIFICOS EN LA HISTORIA 

BACTERIOLOGICA:

1) Anton von Leeuwenhook - Inventor del microscopio y primero en registrar esquemas de seres microscópicos
                                 

2) Roberto Hooke - Acuñó el término "célula" al estudiar tejidos al microcopio.

                           

3) Louis Pasteur - Acabó con la Teoría de la Generación espontánea y descubrió la vacuna contra el ántrax y la rabia.
                                              
4) Roberto Koch - Famoso por sus postulados relacionados con la etiología de una enfermedad originada por un microorganismo además de descubrir al bacilo que lleva su nombre y produce la tuberculosis en el humano (Mycobacterium tuberculosis)
                                    
5) Dmitri Ivanosvky / Martinus Beijerick - Descubridores de los primeros agentes filtrables causantes de enfermedad (mosaico del tabaco) que más tarde serían conocidos como "virus"
                                                             

3ra TEMA: IDENTIFICA BACTERIAS

IDENTIFICACION DE BACTERIAS

         Es el ejercicio práctico en el que se ejercen las pruebas de identificación bacteriana. En la medicina general es común que llegue un paciente con síntomas de alguna infección bacteriana, el determinar un diagnóstico y poder interpretar qué bacteria causó la molestia al paciente es aventurado, pues hay muchas bacterias que causan las mismas enfermedades, por eso es conveniente realizar pruebas de identificacion, que son sumamente importantes para un buen diagnóstico de cualquier patología.

Cada género, inclusive especie, tiene diferentes reacciones cuando se les enfrentan diferentes reactivos, esto se hace a partir de un cultivo puro, ya la bacteria aislada, con estas pruebas podremos decir casi con exactitud de que género y qué especies que esta bacteria. A estas pruebas se les ha llamado como primarias, secundariasComplementarias.

                                         

1. Pruebas Primarias[editar · editar fuente]

Para la identificación de las bacterias en el laboratorio es importante conocer sus características morfológicas, la reacción a la tinción de Gram, agrupación, propiedades, morfología colonial, reacciones metabólicas como producción de enzimas y reacciones de óxido-fermentación.

La identificación bacteriana primaria se basa en los siguientes puntos:

• Tinción de Gram: Revela la forma de la bacteria, agrupación y grupo taxonómico al que pertenece: Gram positivo o Gram negativo.

• Tinción de Ziehl Neelsen: Las bacterias Alcohol-Ácido resistentes (BAAR), son difíciles de cultivar, tal vez y en un agar sangre muestre algo de crecimiento, por eso es útil esta tinción de identificación primaria.

• Tinción de esporas: La espora es un mecanismo de defensa generalmente de los géneros Bacillus y Clostridium.

• Prueba de catalasa: La catalasa es una enzima que descompone al peróxido de hidrógeno en oxígeno y agua, esta enzima es similar a la estructura de la hemoglobina. Excluyendo al género Streptococcus y algunos otros la mayoría de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas tienen catalasa.

La base de esta prueba es demostrar la presencia de la enzima catalasa, colocando 2 o 3 gotas al cultivo.

El resultado es positivo si en la colonia hay efervescencia. Ejemplos:

      Catalasa (+): Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas sp.

      Catalasa (-): Streptococcus spp.

• Prueba de oxidasa: Básicamente es la detección de la enzima oxidasa, muy útil en la identificación de bacterias Gram (-). La reacción de la oxidasa se debe a la presencia del sistema de citocromo-oxidasa, la cual activa citocromos reducidos por oxígeno molecular, por la transferencia de un aceptor al estado terminal del sistema de transferencia de electrones.

El sistema de citocromos está generalmente presente en organismos aeróbicos. Un resultado positivo a la oxidasa consiste en una serie de reacciones en las cuales un componente auto-oxidable del sistema de citocromo es al final catalizado. Utilizando un tubo capilar con tetrametil-p-phenylendiamina al 1%, se adiciona una pequeña cantidad a un cultivo bacteriano colocado sobre un papel filtro y obtenemos las siguientes reacciones: una reacción positiva (presencia de oxidasa) se indica por la apariencia de un color púrpura obscuro en el papel, en menos de 10 segundos; al contrario una reacción negativa, que consiste en una ausencia de color púrpura, indica según los ejemplos:

      Oxidasa (+): Pasteurella multocida

      Oxidasa (-): Escherichia coli

• Ácido de la Glucosa: La mayoría de las bacterias de interés médico usan la glucosa como fuente de carbono, como parte importante de su metabolismo. Se determina si la bacteria usa la glucosa produciendo ácido y/o gas a partir de dicho carbohidrato. En un tubo con agua peptonada al 1% tapado, y un tubo de Durham, se inocula la bacteria por agitación teniendo cuidado de no mover el tubo de Durham e incubándolo 24 horas y 37°C se obtienen los siguientes resultados.

Si la bacteria usa la glucosa producirá ácido y/o gas, por lo tanto el agua peptonada se observará rosa, si produce gas, se observará una burbuja en el tubo de Durham. Ejemplos:

      Ácido y gas a partir de la glucosa: Escherichia coli

      Negativo a producción de gas: Proteus stuartii.

• Prueba de O/F: para realizar esta prueba se usa el medio básico de Hugh y Leisfon con un pH de 7.1. Es un medio semisólido de color verde que se inocula por picadura, contiene carbohidratos como: glucosa, lactosa, sacarosa o maltosa al 10%. Como indicador de pH tiene Azul de bromotimol. Se usa en dos tubos, uno sin aceite y otro con acetie o vaselina sellándolo. Se inoculan los dos tubos con la bacteria por picadura y se mantiene a 37°C por 24 horas, obteniéndose:

TUBO ABIERTO	TUBO SELLADO	INTEPRETACIÓN
Amarillo	Verde	Oxidación (aerobio)
Amarillo (anaerobio facultativo)	Amarillo	Fermentación
Verde (anaerobio estricto)	Amarillo	Fermentación
Verde	Verde	Negativo (NH3)

• Prueba de Motilidad: Llamada también de la gota suspendida. Algunas bacterias son móviles por presentar flagelo, los flagelos son encontrados principalmente en las formas bacilares y pueden presentarse en número y posición variados(monotricos, peritricos, etc.). La base de esta prueba es determinar si la bacteria es móvil o inmóvil. Con un asa de inoculación se le coloca a un cubreobjetos un poco de muestra y se le agrega una gota de agua destilada. Se coloca sobre un portaobjetos y se observa al microscopio. Podremos observar si las bacterias tienen movimientos rectilíneos o curvos y en todas direcciones. Ejemplos:

      Motilidad (+): como en Pseudomonas auruginosa.

      Motilidad (-): como en Pasteurella multocida. 

                                     

2. Pruebas Secundarias.[editar · editar fuente]

La identificación se fundamenta en la comparación del microganismo que deseamos identificar con los microorganismos de identidad conocida. La exactitud de la identificación depende de la eficacia del trabajo preparatorio así como su grado. Estas pruebas se clasifican de la siguiente manera:

• Simples: Citrato, Malonato, MR-VP, Nitrato y Leche Tornasol.
• Múltiples: TSI, LIA y SIM.
• Especiales: Coagulasa, Hialuronidasa y Acriflavina.                                                                                              

1er TEMA: GENERALIDADES EN MICROBIOLOGIA

 Microbiología 

       Es la ciencia encargada del estudio de los microorganismos, seres vivos pequeños (del griego «μικρος» mikros "pequeño", «βιος»bios, "vida" y «-λογία» -logía, tratado, estudio, ciencia), también conocidos como microbios. Se dedica a estudiar los organismos que son sólo visibles a través del microscopio: organismos procariotas y eucariotas simples. Son considerados microbios todos los seres vivos microscópicos, estos pueden estar constituidos por una sola célula (unicelulares), así como pequeños agregados celulares formados por células equivalentes (sindiferenciación celular); estos pueden ser eucariotas (células con núcleo) tales como hongos y protistas, procariotas (células sin núcleo definido) como las bacterias]. Sin embargo la microbiología tradicional se ha ocupado especialmente de los microorganismos patógenos entre bacterias, virus y hongos, dejando a otros microorganismos en manos de la parasitología y otras categorías de la biología.

Aunque los conocimientos microbiológicos de que se dispone en la actualidad son muy amplios, todavía es mucho lo que queda por conocer y constantemente se efectúan nuevos descubrimientos en este campo. Tanto es así que, según las estimaciones más habituales, sólo un 1% de los microbios existentes en la biosfera han sido estudiados hasta el momento. Por lo tanto, a pesar de que han pasado más de 300 años desde el descubrimiento de los microorganismos, la ciencia de la microbiología se halla todavía en su infancia en comparación con otras disciplinas biológicas tales como la zoología, la botánica o incluso la entomología.

Al tratar la microbiología sobre todo los microorganismos patógenos para el hombre, se relaciona con categorías de la medicina como patología, inmunología y epidemiología.